配置高效液相质谱仪是一个系统工程,需要仔细规划和执行。以下是一些关键步骤:,,1. **选择合适的检测器**:根据样品类型和研究目的,选择适合的检测器,如飞行时间质谱(FTMS)、离子阱质谱(IMS)或电喷雾质谱(ESI)。,,2. **安装和调整流动系统**:确保流路系统准确无误,包括泵、色谱柱和进样系统。使用适当的填充物和洗脱程序以优化分离效率。,,3. **准备样本和提取**:将目标化合物提取出样品中,并用适当的溶剂进行稀释。,,4. **设定分析条件**:设置好进样量、流速、梯度等参数,以获得最佳的分析效果。初始设定需要试错,直到得到满意的分辨率和信噪比。,,5. **数据处理和质量控制**:在采集完数据后,进行数据预处理,如基线校正、峰形归一化等。进行质量控制,确保实验结果的准确性和可靠性。,,6. **保存和分析数据**:使用专业的软件进行数据记录和分析,确保数据的完整性和可追溯性。,,7. **验证和优化**:通过对比不同条件下的实验结果,验证配置的有效性。如有必要,进行进一步的优化。,,8. **维护和保养**:定期对设备进行维护和保养,确保其正常运行。,,通过以上步骤,可以有效地配置高效的液相质谱仪,实现高精度和高通量的分析。
1、安装保护柱 - 保护柱的作用是过滤掉流动相和样品中的化学“拉垃圾”,有效去除流动相和样品中的不溶物,虽然目前的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部和色谱柱两端都有1、2μm等不同孔径的过滤器,但过滤器只能去除不溶性颗粒,而不能去除化学污染,有必要安装保护柱,在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时尤其重要。
2、过滤流动相和样品 - 流动相通常由水或缓冲溶液和有机溶剂混合而成,原则上,所有色谱柱的流动相应过滤,但在实际操作中应根据具体情况而有所不同,当有机溶剂使用色谱纯度、石英亚沸水或其他超纯水时,过滤没有更实际的意义,以确保水和有机溶剂的质量,不受污染,当流相中含有缓冲盐时,过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(根据不同的环境温度,夏季一般不超过48小时,冬季一般不超过一周)后,使用前应重新过滤,在注入流路系统之前,准备好的样品试液必须经过0. 45μm ( 0. 22μ孔径滤膜过滤更好),注意区分水系和油系,两者不能混合,防止滤膜溶解造成污染。
3、净化样品 - 当样品含有对色谱柱有害的化学成分时,如蛋白质、糖等有机分子和强吸附物质,以及可能损坏柱填料的基团离子,样品应尽可能分离和净化,以去除多余的杂质成分。
4、避免高柱压 - 尽管高效液相色谱柱能承受6万的压力 psi (磅/平方英寸),过高和过大的压力变化会缩短色谱柱的使用寿命,为了避免这种情况,可以采取以下措施:
(1) 柱压过高时,尽量采用较小的流速,以免超过柱最大允许压力的一半。
(2) 当流速较大时,应采用流速梯度的方法将流速分步到位。
(3) 使用手动进样阀时,进样阀应尽可能快地切换,否则,超过20%的压力冲击会迅速报废柱,当使用多柱连接时,应避免在高压下进行柱切换。
5、注意温度和 pH - 硅胶色谱柱的最高使用温度一般不超过60℃,应低于40℃,特别是当流相pH接近使用极限时,应降低使用温度。
过高的温度会加速键合相的水解和硅胶的溶解,从而改变填料的性质,使柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。
目前键合硅胶色谱柱标注的pH适用范围可达2~10. 在实际使用中,特别是在碱性条件下,应避免极端pH条件(pH≥8)下使用,应在极端pH条件下使用时,可采用以下方法避免柱损伤:
(1) 在泵和进样阀之间安装预柱(饱和柱)以饱和流动相
(2) 降低使用温度
(3) 检查结束后,立即用与使用的流动相混合的“温和溶剂”彻底清洗
6、正确及时的清洗 - 在开始测试之前,您应该知道柱中当前的溶剂是什么,对于新色谱柱,如果没有特殊说明,则为评估报告中使用的流动相,柱中当前的溶剂必须与分析样品中使用的流动相互溶解,如果不能溶解,则应使用第三种溶剂过渡,两者都可以相互溶解。